LOXL1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401965-ACT

LOXL1はリシルオキシダーゼ様1（lysyl oxidase–like 1）をコードしており、分泌型の銅依存性アミンオキシダーゼとして、コラーゲンおよびエラスチン中のリジン残基の酸化的脱アミノ化を触媒します。これにより共有結合性の架橋形成が促進され、細胞外マトリックス（ECM）の構造が安定化されます。弾性線維の組み立てやマトリックスのリモデリングを調節することで、LOXL1は組織の力学特性、細胞—マトリックス間シグナル伝達、ならびに線維化や創傷修復といった過程に影響を与えます。LOXL1活性の変化は、剥離症候群／緑内障リスクを含む結合組織および眼のECM異常と関連づけられており、血管や骨盤底組織の健全性という観点からも研究されています。マトリックス修飾酵素としてのLOXL1は、ヒト細胞モデルにおいてECM恒常性、メカノバイオロジー、そしてリモデリング駆動性の疾患表現型を解析するうえで有用なターゲット（ノード）となります。

LOXL1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LOXL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LOXL1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LOXL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLOXL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LOXL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLOXL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLOXL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLOXL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLOXL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。