LONP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-428748-ACT

O gene Lonp1 de camundongo codifica a LONP1, uma protease AAA+ dependente de ATP localizada na matriz mitocondrial, que integra o controle de qualidade proteica à manutenção da capacidade de fosforilação oxidativa. A LONP1 reconhece e degrada proteínas mitocondriais mal dobradas ou danificadas por oxidação, sustenta a estabilidade do DNA mitocondrial e ajuda a coordenar a resposta mitocondrial a proteínas mal dobradas (UPRmt) e a proteostase sob estresse metabólico e oxidativo. Por meio dessas funções, ela influencia a atividade da cadeia respiratória, a biogênese mitocondrial e a sinalização de estresse ligada à apoptose. Alterações na atividade da LONP1 têm sido associadas a fenótipos de disfunção mitocondrial relevantes para neurodegeneração, estresse cardiometabólico e remodelamento proliferativo, tornando o Lonp1 um alvo útil para estudos mecanísticos de homeostase mitocondrial.

LONP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Lonp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LONP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Lonp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Lonp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LONP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Lonp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LONP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LONP1 em células tumorais com expressão de Lonp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.