LOH12CR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m2): sc-426735-KO-2

概要

Borcs5 は、微小管依存性の輸送系と結び付くことでリソソームおよびリソソーム関連オルガネラを細胞周辺部へ配置するのを助ける BORC（BLOC-1 関連複合体）の構成要素である LOH12CR1 をコードしています。この機能を通じて、LOH12CR1 はエンドリソソーム輸送、分解能の空間的制御、そしてリソソーム分布に依存するオートファジーや膜タンパク質のターンオーバーなどの過程に寄与します。BORC 依存的なリソソーム分散は、オルガネラの運動性と細胞恒常性を協調して制御する低分子量 GTPase およびキネシン駆動経路と連携しています。リソソームの位置決めや輸送の制御異常は神経生物学に広く関係しており、オートファジーフラックスの変化やオルガネラ輸送異常が共通の表現型として見られる神経変性や炎症の実験モデルにおいても重要です。

LOH12CR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）は、mouse細胞株におけるBorcs5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Borcs5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Borcs5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LOH12CR1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LOH12CR1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Borcs5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LOH12CR1の機能に不可欠なBorcs5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Borcs5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LOH12CR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLOH12CR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Borcs5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LOH12CR1 HDRプラスミド（m）および LOH12CR1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBorcs5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBorcs5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。