LNX4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412056-ACT

O PDZRN4 humano codifica a LNX4, uma ligase E3 de ubiquitina do tipo RING contendo domínio PDZ, implicada na regulação dependente de ubiquitina da renovação (turnover) de proteínas e na organização de complexos de sinalização. Por meio de interações mediadas por PDZ, acredita-se que a LNX4 influencie o tráfego e a estabilidade de receptores e proteínas de andaime (scaffold), moldando vias a jusante que governam a polaridade celular, a adesão e a diferenciação. Como parte da rede mais ampla da família LNX, o PDZRN4 é relevante para estudos de proteostase e de remodelação da transdução de sinais que acompanham respostas celulares ao estresse e a transformação oncogênica. Expressão alterada ou programas de ubiquitinação desregulados envolvendo complexos associados a PDZRN4 têm sido explorados em contextos de biologia tumoral e neurobiologia, sustentando sua utilidade como alvo de pesquisa mecanística.

LNX4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PDZRN4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LNX4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PDZRN4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PDZRN4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LNX4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PDZRN4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LNX4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LNX4 em células tumorais com expressão de PDZRN4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.