LNX4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412056-ACT

ヒトPDZRN4は、PDZドメインを含むRING型E3ユビキチンリガーゼであるLNX4をコードしており、ユビキチン依存的なタンパク質分解回転（ターンオーバー）やシグナル伝達複合体の編成の制御に関与すると考えられています。PDZを介した相互作用を通じて、LNX4は受容体や足場タンパク質の輸送（トラフィッキング）と安定性に影響し、細胞極性、接着、分化を司る下流経路を形成します。より広いLNXファミリーのネットワークの一部として、PDZRN4は、細胞ストレス応答やがん化（腫瘍化）に伴って起こるプロテオスタシスおよびシグナル伝達の再編を扱う研究において重要です。PDZRN4関連複合体が関わる発現変動やユビキチン化プログラムの破綻は、腫瘍生物学や神経生物学の文脈で検討されており、機構解明のための研究標的としての有用性が示されています。

LNX4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PDZRN4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LNX4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PDZRN4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPDZRN4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LNX4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPDZRN4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLNX4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPDZRN4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLNX4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。