LMX1B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402945

Panoramica

LMX1B codifica un fattore di trascrizione LIM-homeobox che regola la specificazione del destino cellulare e la strutturazione dei tessuti durante lo sviluppo, con ruoli di rilievo nell’identità dorsale dell’arto, nella differenziazione dei podociti e nei programmi dei sottotipi neuronali. Controlla l’espressione genica coordinando interazioni mediate dal dominio LIM con co-regolatori trascrizionali e il legame al DNA mediato dall’homeodominio, influenzando la morfogenesi, l’organizzazione della matrice extracellulare e l’architettura del citoscheletro. Nella biologia renale, LMX1B sostiene l’integrità della barriera di filtrazione glomerulare modulando le reti geniche dei podociti, collegandosi così a vie che governano la struttura del diaframma di filtrazione (slit diaphragm) e la dinamica dell’actina. Alterazioni genetiche di LMX1B sono associate alla sindrome unghie-rotula e a fenotipi renali e scheletrici correlati, rendendolo un bersaglio pertinente per studiare la regolazione trascrizionale nello sviluppo e nell’organogenesi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LMX1B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LMX1B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LMX1B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LMX1B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LMX1B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LMX1B per lo studio della segnalazione di LMX1B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LMX1B critici per la funzione di LMX1B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LMX1B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LMX1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LMX1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LMX1B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LMX1B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LMX1B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LMX1B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LMX1B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.