Plásmido CRISPR de Activación (m) LMP7: sc-421450-ACT

Psmb8 codifica la subunidad catalítica del inmunoproteasoma murino LMP7 (β5i), un componente clave del proteasoma 20S inducible por IFN-γ que remodela la especificidad proteolítica durante la inflamación. LMP7 favorece la generación de péptidos para el MHC de clase I y respalda el procesamiento y la presentación de antígenos, vinculando la proteostasis con la vigilancia inmunitaria adaptativa. Al influir en programas inflamatorios asociados a NF-κB y en las respuestas celulares al estrés por citocinas, la actividad de Psmb8 afecta la diferenciación de las células inmunitarias y sus estados de activación. La disfunción del inmunoproteasoma se ha relacionado con una presentación antigénica aberrante y fenotipos inflamatorios crónicos, lo que convierte a Psmb8 en una diana relevante para la investigación en inmunología y proteostasis en modelos murinos.

LMP7 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Psmb8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LMP7 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Psmb8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Psmb8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LMP7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Psmb8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LMP7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LMP7 en células tumorales con expresión de Psmb8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.