LMO2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-421447-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- LMO2 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- LMO2ダブルニカースプラスミド（m）およびLMO2ダブルニカースプラスミド（m2）は、Lmo2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: LMO2 抗体 (1A9-1): sc-65736
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
LMO2 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-421447-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LMO2 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-421447-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Lmo2 は、細胞運命決定を制御する多タンパク質性転写複合体を組み立てる核内アダプターである LIM ドメインのみタンパク質 LMO2 をコードする。マウスの造血において LMO2 は、TAL1/SCL、GATA ファミリータンパク質、LDB1 などの因子とともに制御ネットワークを形成し、幹細胞・前駆細胞の維持、赤血球系分化、血管発生を支える遺伝子発現プログラムの協調に関与する。LMO2 に関連する転写回路は、増殖および分化のダイナミクスに影響する、より広範なクロマチン制御や系譜特異化プロセスとも交差している。Lmo2 発現の異常や複合体構成の変化は、白血病化に関わる転写プログラムの再配線機構や関連する血液疾患の生物学を、in vivo および培養細胞で研究するためのモデルとして広く用いられている。
LMO2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Lmo2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Lmo2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Lmo2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Lmo2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。