Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
LIS1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-422102-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- LIS1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- LIS1ダブルニカースプラスミド（m）およびLIS1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Pafah1b1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: LIS1 抗体 (H-7): sc-374586
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
LIS1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-422102-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LIS1 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-422102-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのPafah1b1はLIS1をコードしており、LIS1は微小管依存性輸送、有糸分裂紡錘体の配向、ならびに神経細胞移動時におけるダイニン–ダイナクチンモーターのカーゴ結合に必須のダイニン調節タンパク質である。LIS1はNDE1/NDEL1および細胞質ダイニンと協調して中心体の位置決め、核移動、皮質発生を制御し、細胞極性や細胞分裂を統御する経路と関連づけられている。LIS1依存的プロセスの破綻は、神経細胞層構造や軸索ガイダンスにおける滑脳症関連の異常を含む神経発達表現型と強く関連する。そのためPafah1b1は、脳発生、繊毛および微小管関連ダイナミクス、ならびにダイニン駆動性トラフィッキングのモデル研究で広く解析されている。
LIS1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Pafah1b1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Pafah1b1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Pafah1b1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Pafah1b1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。