LIN-28B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402851-ACT

ヒトのLIN28Bは、RNA結合タンパク質であるLIN-28Bをコードしている。LIN-28Bは、let-7マイクロRNA（miRNA）ファミリーの成熟を抑制するヘテロクロニック因子であり、その結果、増殖・代謝・系譜決定を制御する転写後の遺伝子制御プログラムを再編成する。let-7依存性ネットワークを調節することで、LIN-28Bは発生のタイミング、幹細胞様の細胞状態、細胞リプログラミングに影響を及ぼし、MYC、RAS/MAPK、mTORシグナルの出力に関連する経路とも交差する。LIN28B活性の異常は、がん原性の転写プログラムや小児の発達障害を含む複数の疾患関連状況において、分化の変化および増殖制御の破綻と関連づけられている。これらの特性により、LIN28Bはヒト細胞におけるmiRNA生合成、RNA代謝、遺伝子制御回路を研究するうえで有用な結節点となる。

LIN-28B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LIN28Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LIN-28B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LIN28B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLIN28B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LIN-28Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLIN28B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLIN-28B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLIN28B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLIN-28B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。