LHX4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421427

Übersicht

Lhx4 kodiert das LIM-Homeobox-Protein 4 (LHX4), einen Transkriptionsfaktor, der über eine Homeodomäne an DNA bindet und Genexpressionsprogramme koordiniert, die für die embryonale Musterbildung und Organogenese entscheidend sind. In der Mausentwicklung trägt LHX4 zur Spezifikation und Differenzierung der Zelllinien des Vorderlappens der Hypophyse sowie zu übergeordneten neuronalen Entwicklungsprozessen bei, indem es mit LIM-Domänen-Kofaktoren und homeoboxbasierten Transkriptionsnetzwerken zusammenwirkt. Seine Aktivität beeinflusst Zellschicksalsentscheidungen, Linienfestlegung und die durch Morphogene gesteuerte Transkriptionsregulation während der Gewebebildung. Eine Fehlregulation LHX4-assoziierter Entwicklungswege ist für die Forschung zu hypophysären und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen relevant, da eine veränderte Dosierung von Transkriptionsfaktoren die Ausbildung endokriner Achsen und die Etablierung neuronaler Schaltkreise stören kann.

Das LHX4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Lhx4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Lhx4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Lhx4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LHX4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Lhx4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LHX4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Lhx4-Exone abzielen, die für die LHX4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Lhx4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LHX4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LHX4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Lhx4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LHX4 HDR-Plasmid (m) und LHX4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Lhx4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Lhx4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.