LHX4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421427

概要

Lhx4 は LIM ホメオボックスタンパク質 4（LHX4）をコードしており、LHX4 はホメオドメインを介して DNA に結合し、胚のパターニングや器官形成に不可欠な遺伝子発現プログラムを統合的に制御する転写因子です。マウスの発生過程では、LHX4 は LIM ドメイン共因子やホメオボックス型転写ネットワークと連携することで、前葉下垂体の系譜の指定と分化、ならびにより広範な神経発生プロセスに寄与します。その活性は、組織形成期における細胞運命決定、系譜コミットメント、モルフォゲン応答性の転写制御に影響します。LHX4 に関連する発生経路の制御異常は、下垂体および神経発生の表現型に関する研究と関連が深く、転写因子量の変化が内分泌軸の形成や神経回路の確立を攪乱し得ることが示唆されます。

LHX4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLhx4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lhx4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Lhx4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LHX4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LHX4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lhx4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LHX4の機能に不可欠なLhx4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Lhx4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LHX4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLHX4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lhx4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LHX4 HDRプラスミド（m）および LHX4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLhx4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLhx4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。