LHX3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404482

概要

LHX3（LIM homeobox 3）は、LIMドメインをもつホメオドメイン型転写因子をコードしており、胚発生の過程で系譜指定および終末分化プログラムを協調的に制御します。下垂体と神経系では、LHX3が配列特異的なDNA結合と補因子のリクルートを介して、ホルモン産生細胞の運命決定や運動ニューロン発生を制御する転写ネットワークを調節します。LHX3依存的な遺伝子制御が破綻すると、前葉下垂体の器官形成や神経回路の連結性を司る発生経路が攪乱されます。ヒトの遺伝学的知見からは、LHX3機能の変化が、神経発達表現型に幅を伴う複合下垂体ホルモン欠損症と関連することが示されており、発生における転写制御を研究するうえで有用な解析ノードとなります。

LHX3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLHX3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LHX3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LHX3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LHX3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LHX3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LHX3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LHX3の機能に不可欠なLHX3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、LHX3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LHX3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLHX3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LHX3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LHX3 HDRプラスミド（h）および LHX3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLHX3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLHX3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。