leupaxin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430706

概要

マウスLpxnは、LIMドメインを有するフォーカルアドヒージョン（接着斑）アダプタータンパク質であるロイパキシン（leupaxin）をコードしており、インテグリン連結複合体やアクチン制御タンパク質と結合して、細胞骨格リモデリングを協調的に制御します。ロイパキシンは、フォーカルアドヒージョンキナーゼ（FAK）やSrcファミリーキナーゼが関与する接着依存的シグナル伝達経路に参加し、細胞の伸展、遊走、メカノトランスダクションに影響を与えます。また、免疫系および間葉系の文脈では、核内受容体や他の共調節因子との相互作用を介して転写プログラムを調節し得ます。フォーカルアドヒージョンシグナルの破綻やロイパキシン発現の変化は、浸潤性の細胞挙動や炎症性微小環境の動態と関連づけられており、がん生物学や免疫細胞トラフィッキングの研究における重要性を示しています。

leupaxin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLpxn遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lpxn内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Lpxnのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、leupaxinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、leupaxinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lpxn欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• leupaxinの機能に不可欠なLpxnエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Lpxnゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• leupaxin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびleupaxin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lpxn遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  leupaxin HDRプラスミド（m）および leupaxin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLpxnホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLpxn標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。