Lck BP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420811

Visão geral

Hcls1 codifica, em camundongo, o substrato 1 de Lyn específico de células hematopoéticas (Lck BP-1), uma proteína adaptadora enriquecida em linhagens imunes que conecta a sinalização do receptor de antígeno à remodelação do citoesqueleto. Por meio de interações dependentes de fosforilação com quinases da família Src e complexos reguladores de actina, a Lck BP-1 contribui para o fluxo de cálcio induzido por imunorreceptores, a ativação de MAPK e mudanças dinâmicas na forma e na motilidade celular. Esse nó de sinalização influencia a ativação, a adesão e o tráfego de linfócitos, ligando eventos proximais ao receptor a respostas transcricionais a jusante. A desregulação de vias associadas a Hcls1 é relevante para estudos de sinalização inflamatória, ativação aberrante de células imunes e biologia de células hematopoéticas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Lck BP-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Hcls1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Hcls1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Hcls1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Lck BP-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Hcls1 para a investigação da sinalização de Lck BP-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Hcls1 críticos para a função Lck BP-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Hcls1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Lck BP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Lck BP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Hcls1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Lck BP-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Lck BP-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Hcls1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Hcls1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.