Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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LC3B Plasmide Double Nickase (m): sc-426563-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LC3B Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LC3B Double Nickase Plasmid (m) e il LC3B Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Map1lc3b. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LC3B Antibody (G-9): sc-376404
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LC3B Plasmide Double Nickase (m) | sc-426563-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LC3B Plasmide Double Nickase (m2) | sc-426563-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Map1lc3b** codifica la proteina associata ai microtubuli 1, catena leggera 3 beta (LC3B), un componente centrale del macchinario dell’autofagia che va incontro a lipidazione per formare LC3-II e associarsi alle membrane degli autofagosomi. LC3B sostiene l’espansione del fagoforo, la maturazione dell’autofagosoma e il turnover selettivo dei carichi tramite interazioni con recettori contenenti il motivo LIR, come p62/SQSTM1, collegando i substrati ubiquitinati al sequestro autofagico. In quanto marcatore ampiamente utilizzato del flusso autofagico, LC3B è al centro delle vie di proteostasi dipendenti dai lisosomi, che intersecano il controllo qualità mitocondriale, la segnalazione dell’immunità innata e le risposte allo stress cellulare. La disregolazione dell’autofagia associata a LC3B è stata implicata in meccanismi rilevanti per neurodegenerazione, stati infiammatori, biologia delle infezioni e adattamento delle cellule tumorali, rendendo **Map1lc3b** un bersaglio comune per l’analisi delle vie di segnalazione.
LC3B Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Map1lc3b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Map1lc3b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Map1lc3b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Map1lc3b interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.