Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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LC3B Double Nickase Plasmid (m): sc-426563-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LC3B Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LC3B Double-Nickase-Plasmid (m) und LC3B Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Map1lc3b abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LC3B: sc-376404
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LC3B Double Nickase Plasmid (m) | sc-426563-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LC3B Double Nickase Plasmid (m2) | sc-426563-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Map1lc3b** kodiert das mikrotubuliassoziierte Protein 1, Leichtkette 3 Beta (LC3B), eine zentrale Komponente der Autophagie-Maschinerie, die durch Lipidierung zu **LC3-II** umgewandelt wird und mit Autophagosomenmembranen assoziiert. LC3B unterstützt die Expansion des Phagophors, die Reifung des Autophagosoms sowie den selektiven Abbau von Fracht durch Interaktionen mit LIR-haltigen Rezeptoren wie **p62/SQSTM1**, wodurch ubiquitinierte Substrate mit der autophagischen Sequestrierung verknüpft werden. Als weit verbreiteter Marker des autophagischen Flusses ist LC3B zentral für lysosomenabhängige Proteostasewege, die sich mit der mitochondrialen Qualitätskontrolle, angeborenen Immun-Signalwegen und zellulären Stressantworten überschneiden. Eine Fehlregulation der LC3B-assoziierten Autophagie wurde mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die für Neurodegeneration, Entzündungszustände, Infektionsbiologie und die Anpassung von Krebszellen relevant sind, wodurch **Map1lc3b** ein häufiges Ziel zur Analyse entsprechender Signalwege darstellt.
LC3B Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Map1lc3b-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Map1lc3b abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Map1lc3b-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Map1lc3b-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.