CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
Layilin Double Nickaseプラスミド (h): sc-408326-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Layilin Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Layilinダブルニカースプラスミド（h）およびLayilinダブルニカースプラスミド（h2）は、LAYNを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Layilin 抗体 (C-7): sc-377389
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Layilin Double Nickaseプラスミド (h) | sc-408326-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Layilin Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-408326-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LAYNは、膜ラッフルや接着部位に多く存在する膜貫通型のC型レクチン様受容体であるライリリン（layilin）をコードしており、細胞外からの刺激を細胞皮質のアクチン細胞骨格へと結び付ける役割を担います。ライリリンはヒアルロン酸に富む微小環境と関連し、細胞骨格やシグナル伝達の制御因子と相互作用することで、細胞形態の再構築、運動性、ならびに接着依存的なシグナル伝達経路に影響を与えます。動的な細胞—細胞外マトリックス界面の構成要素として、LAYNは、腫瘍微小環境の生物学や炎症性組織リモデリングなど、遊走プログラムや免疫—間質相互作用が変化する状況で研究されています。LAYN発現の異常は複数の疾患関連トランスクリプトームデータセットで報告されており、接着および遊走表現型を解析するための機構的な結節点としての有用性が示唆されています。
Layilin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LAYN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LAYN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LAYNの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LAYNが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。