Langerin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401949-ACT

CD207はラングリン（Langerin）をコードする遺伝子であり、上皮バリアにおける病原体認識と抗原捕捉に機能する、ランゲルハンス細胞および関連する樹状細胞サブセットに豊富に発現するC型レクチン受容体です。ラングリンはCa²⁺依存的に糖鎖モチーフに結合し、Birbeck顆粒へのエンドサイトーシスを介して抗原のプロセシングおよび提示プログラムを形成し、適応免疫のプライミングに影響を与えます。レクチン依存的な取り込みとエンドソーム区画への輸送を通じて、自然免疫のセンシングや炎症シグナル伝達とも交差し、サイトカイン産生やT細胞の分極化を調節します。CD207/ラングリンの発現変化やランゲルハンス細胞機能の変容は、皮膚免疫の恒常性、アレルギー性炎症、感染に伴うバリア免疫応答の研究において重要な要素となります。

Langerin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD207の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Langerin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD207 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD207転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Langerinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD207遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLangerin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD207発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLangerin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。