LAMP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400120-NIC

LAMP1（リソソーム関連膜タンパク質1）は、高度に糖鎖修飾されたI型膜タンパク質で、リソソームおよび後期エンドソームに豊富に局在し、オルガネラの完全性を支えるとともに、リソソームの配置、融合ダイナミクス、ならびにカーゴの代謝回転に寄与します。オートファジー－リソソーム経路、エンドサイトーシス輸送、リソソーム膜の安定性における役割を通じて、LAMP1は分解能を細胞ストレス応答と協調させるのに役立ちます。さらにLAMP1は、免疫細胞の脱顆粒や抗原処理の文脈にも関与し、リソソーム機能を炎症性シグナル伝達と結び付けます。LAMP1が関与するリソソーム生物学の破綻は、神経変性、リソソーム蓄積症、感染に伴う宿主－病原体相互作用、ならびにがん細胞の浸潤・転移といった表現型との関連が報告されています。

LAMP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LAMP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LAMP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LAMP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LAMP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。