Plásmido Doble Nickase (h) Laminin β-1: sc-401105-NIC

LAMB1 codifica la laminina β-1, una subunidad central de múltiples heterotrímeros de laminina que se ensamblan en las membranas basales y organizan la arquitectura de la matriz extracelular. Mediante interacciones con integrinas, distroglicano y otros componentes de la matriz, la laminina β-1 favorece la adhesión celular, la polaridad, la migración y la supervivencia, e influye en nodos de señalización como la quinasa de adhesión focal (FAK) y PI3K/AKT, así como en la dinámica del citoesqueleto. En tejidos humanos, LAMB1 contribuye a las propiedades de barrera epitelial y endotelial y guía procesos del desarrollo, incluido el crecimiento de neuritas y la morfogénesis tisular. La composición alterada de laminina o el ensamblaje perturbado de la membrana basal que involucra a LAMB1 se ha asociado con defectos estructurales congénitos y puede modular fenotipos invasivos y fibróticos en modelos relevantes de enfermedad.

Laminin β-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LAMB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LAMB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LAMB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LAMB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.