Plásmido CRISPR de Activación (h) Laminin β-1: sc-401105-ACT

LAMB1 codifica la laminina β1, una subunidad central de múltiples heterotrímeros de laminina que constituyen un componente estructural y de señalización principal de las membranas basales. La laminina β1 favorece el ensamblaje de la matriz extracelular, la adhesión celular, la polaridad y la migración mediante interacciones con integrinas y otros receptores de la matriz, influyendo en vías como la señalización de adhesiones focales y la remodelación del citoesqueleto. Al mantener la integridad de la membrana basal y la comunicación célula–matriz, la laminina β1 contribuye a la arquitectura tisular en compartimentos epiteliales, vasculares y del sistema nervioso. La expresión desregulada de LAMB1 o la organización alterada de la membrana basal se estudian con frecuencia en el contexto de defectos del desarrollo, la biología de la invasión tumoral y la metástasis, y los microambientes fibróticos o inflamatorios.

Laminin β-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LAMB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Laminin β-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LAMB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LAMB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Laminin β-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LAMB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Laminin β-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Laminin β-1 en células tumorales con expresión de LAMB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.