Lamin B2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401873-ACT

LMNB2 codifica a lamina B2, um componente central da lâmina nuclear que polimeriza sob a membrana nuclear interna para manter a forma do núcleo e a estabilidade mecânica. A lamina B2 participa da ancoragem da cromatina, do timing da replicação do DNA e da remontagem do envelope nuclear durante a mitose, conectando a organização do genoma à progressão do ciclo celular e às respostas ao estresse. Por meio de interações com domínios associados às laminas e com complexos do poro nuclear, ela influencia programas transcricionais e vias de integridade do genoma. Alterações na função da família das laminas B estão associadas a defeitos na arquitetura nuclear, organização aberrante da cromatina e fenótipos relevantes para envelhecimento precoce, neurodesenvolvimento e biologia de células cancerígenas.

Lamin B2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LMNB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Lamin B2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LMNB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LMNB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Lamin B2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LMNB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Lamin B2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Lamin B2 em células tumorais com expressão de LMNB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.