LAGE-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403565-ACT

CTAG2 codifica LAGE-1, um antígeno câncer/testículo com expressão altamente restrita em tecidos normais de adultos e reexpressão frequente em múltiplos tipos tumorais. O LAGE-1 está implicado em programas transcricionais associados ao tumor e em estados celulares ligados à proliferação e ao reconhecimento imune, e é comumente estudado em conjunto com antígenos relacionados, como membros da família MAGE, no contexto da apresentação de antígenos e da imunobiologia tumoral. Embora seu papel mecanístico preciso permaneça incompletamente definido, a expressão de CTAG2 é amplamente utilizada como biomarcador de antigenicidade tumoral e de estado de linhagem, apoiando pesquisas sobre reativação epigenética, sinalização oncogênica e fenótipos de evasão imune. A expressão desregulada de CTAG2/LAGE-1 foi relatada em diversos cânceres, tornando-o relevante para estudos de heterogeneidade tumoral e de pressões seletivas impulsionadas por antígenos.

LAGE-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTAG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LAGE-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTAG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTAG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LAGE-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTAG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LAGE-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LAGE-1 em células tumorais com expressão de CTAG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.