Ksr-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401768

Visão geral

KSR1 codifica o “kinase suppressor of Ras 1” (Ksr-1), uma proteína de andaime que organiza componentes da cascata RAF–MEK–ERK/MAPK para modular a amplitude, a duração e a localização subcelular do sinal. Ao coordenar a montagem do módulo MAPK a jusante de receptores tirosina-quinase e de RAS, a Ksr-1 contribui para a regulação de decisões de proliferação, diferenciação e sobrevivência celular. A atividade e a expressão de KSR1 têm sido associadas a alterações na saída da via MAPK em contextos de sinalização oncogénica, e também foi implicada em redes de sinalização imunitária e inflamatória que se cruzam com programas de transcrição dependentes de ERK. Estas características fazem de KSR1 um nó útil para dissecar a arquitetura da via, o controlo por feedback e a propagação de sinal específica do contexto em células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Ksr-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene KSR1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do KSR1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do KSR1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Ksr-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de KSR1 para a investigação da sinalização de Ksr-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) KSR1 críticos para a função Ksr-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos KSR1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Ksr-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Ksr-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus KSR1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Ksr-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Ksr-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia KSR1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo KSR1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.