Ksr-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401768

Übersicht

KSR1 kodiert Kinase Suppressor of Ras 1 (Ksr-1), ein Scaffold-Protein, das Komponenten der RAF–MEK–ERK/MAPK-Kaskade organisiert, um Signalstärke, -dauer und subzelluläre Lokalisation zu modulieren. Durch die Koordination des Zusammenbaus des MAPK-Moduls downstream von Rezeptor-Tyrosinkinasen und RAS trägt Ksr-1 zur Regulation von Proliferations-, Differenzierungs- und Überlebensentscheidungen bei. Aktivität und Expression von KSR1 wurden in onkogenen Signalkontexten mit veränderter Ausgabe des MAPK-Signalwegs in Verbindung gebracht; außerdem wird KSR1 auch in Immun- und Entzündungssignalnetzwerken diskutiert, die mit ERK-abhängigen Transkriptionsprogrammen verknüpft sind. Diese Eigenschaften machen KSR1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um Verschaltung, Feedback-Kontrolle und kontextabhängige Signalweiterleitung in humanen Zellen zu untersuchen.

Das Ksr-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KSR1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KSR1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KSR1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ksr-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KSR1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ksr-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KSR1-Exone abzielen, die für die Ksr-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KSR1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ksr-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Ksr-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KSR1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ksr-1 HDR-Plasmid (h) und Ksr-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KSR1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KSR1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.