Plásmido CRISPR de Activación (h) KRAS: sc-416674-ACT

KRAS codifica una pequeña GTPasa que funciona como un interruptor molecular, alternando entre los estados unidos a GDP y a GTP para transmitir señales desde receptores tirosina cinasa activados hacia efectores aguas abajo. El KRAS activo coordina vías clave, incluidas las redes RAF–MEK–ERK (MAPK), PI3K–AKT–mTOR y RalGDS, para regular la proliferación, la supervivencia, el metabolismo y la dinámica del citoesqueleto. Un control estricto de la señalización de KRAS es necesario para decisiones normales del destino celular y la homeostasis tisular. La actividad desregulada de KRAS y la reconfiguración de sus vías se implican con frecuencia en la transformación oncogénica, respuestas alteradas al estrés y adaptaciones de señalización asociadas a la resistencia en múltiples contextos tumorales.

KRAS El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KRAS sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KRAS El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KRAS en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KRAS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KRAS. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KRAS y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KRAS en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KRAS en células tumorales con expresión de KRAS silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.