KLF15 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402267-LAC

KLF15 (Krüppel-like factor 15) codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco che si lega a elementi promotori ricchi in GC per coordinare, in modo dipendente dal contesto, programmi genici che controllano la differenziazione cellulare, l’omeostasi metabolica e la trascrizione in risposta allo stress. Nei tessuti umani, KLF15 integra i segnali ormonali e nutrizionali per modulare vie coinvolte nella regolazione della gluconeogenesi, nell’utilizzo dei lipidi e nell’equilibrio energetico mitocondriale, e contribuisce anche al rimodellamento trascrizionale del muscolo e del cuore. Una deregolazione dell’espressione di KLF15 è stata associata a fenotipi metabolici alterati e a risposte tissutali maladattative in ambito cardiovascolare e nel muscolo scheletrico, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale del metabolismo energetico e le transizioni dello stato cellulare. In quanto regolatore trascrizionale con numerosi bersagli a valle, KLF15 viene spesso analizzato per mappare reti geniche che collegano segnali ambientali a output epigenetici e a livello di promotore.

Le particelle di attivazione lentivirale KLF15 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KLF15 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale KLF15 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KLF15, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di KLF15. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KLF15 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.