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KiSS-1CRISPR激活质粒(h) | sc-402710-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类 KISS1 基因编码 KiSS-1 肽前体,该前体经蛋白水解加工生成 kisspeptin(吻肽),作为分泌型配体与 G 蛋白偶联受体 KISS1R(GPR54)结合。Kisspeptin–KISS1R 信号可激活依赖 PLC/PKC 的钙动员以及 MAPK 通路,从而整合对促性腺激素释放激素(GnRH)释放的神经内分泌调控,并进一步参与更广泛的生殖轴调节。除内分泌功能外,KISS1 还与细胞迁移和侵袭的调控相关,在不同肿瘤模型中对转移行为的影响具有情境依赖性。KISS1/KISS1R 信号的异常与生殖障碍及肿瘤生物学有关,因此是研究配体-受体信号传导与转录调控的一个有价值节点。
KiSS-1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性KISS1的表达。
KiSS-1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的KISS1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于KISS1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性KiSS-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的KISS1位点,并能够研究内源性位点上依赖于KiSS-1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在KISS1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟KiSS-1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。