Kinectin 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404296-ACT

ヒトのKTN1は、キネシンに対する小胞体（ER）膜関連受容体であるキネクチン1をコードしており、微小管ベースの輸送をERの組織化および動態と結び付けるのに寄与します。キネシンモーターや細胞骨格ネットワークとの相互作用を介して、キネクチンは小胞輸送、オルガネラの配置、ER形態の維持に関与し、これらの過程は分泌能や細胞内シグナル伝達に影響します。KTN1に関連する輸送とER恒常性は、アンフォールド・プロテイン・レスポンス（UPR）を含むタンパク質フォールディングやストレス応答を制御する経路と交差しており、神経回路の接続不全や細胞構築の変化に伴う表現型とも関連します。ERと微小管のカップリングの破綻は神経生物学や細胞移動に広く関与するとされるため、KTN1は細胞内輸送制御の機構研究に有用な結節点となります。

Kinectin 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KTN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Kinectin 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KTN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKTN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Kinectin 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKTN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKinectin 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKTN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKinectin 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。