KIBRA CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402677

概要

WWC1はKIBRAをコードしており、KIBRAはWWドメインを含む足場（スキャフォールド）タンパク質で、脳と腎臓に豊富に発現し、WWドメインおよびC2ドメインを介してタンパク質間相互作用を統合・調整します。KIBRAはLATSキナーゼや関連因子との相互作用を通じてHippo経路の制御に関与し、細胞極性、接触阻害、ならびに増殖とアポトーシスの転写制御を結び付けます。また、膜輸送や細胞骨格リモデリングの経路とも連携し、エンドサイトーシスや方向性移動などの過程を支えます。WWC1/KIBRAシグナルの制御異常はシナプス可塑性の変化と関連することが報告されており、がんに関連する増殖制御や神経生物学の文脈でも研究されています。

KIBRA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるWWC1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、WWC1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、WWC1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KIBRAタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KIBRAシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、WWC1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KIBRAの機能に不可欠なWWC1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、WWC1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KIBRA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKIBRA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、WWC1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KIBRA HDRプラスミド（h）および KIBRA HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWWC1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWWC1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。