KIAA0100 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408006-ACT

ヒトKIAA0100（BCOX1としても知られる）は、細胞質に局在する大型で機能解明が十分ではないタンパク質をコードしており、細胞増殖および生存プログラムの制御に関与すると考えられています。トランスクリプトーム解析や機能解析により、KIAA0100は増殖、ストレス適応、細胞骨格あるいは小胞輸送の組織化といった過程と関連づけられており、細胞の健全性を支える協調的なシグナル伝達ネットワークにおける役割が示唆されています。KIAA0100の発現変動は複数の腫瘍種で報告されており、攻撃的な表現型と関連することから、がん性の転写状態を研究するための有用な分子指標となります。機序に関する注釈が限られているため、KIAA0100は下流経路や相互作用パートナーをマッピングする目的で、摂動（perturbation）アプローチによる解析がしばしば行われています。

KIAA0100 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KIAA0100の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KIAA0100 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KIAA0100 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKIAA0100転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KIAA0100の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKIAA0100遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKIAA0100依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKIAA0100発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKIAA0100経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。