Ki67 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421656

Visão geral

Mki67 codifica a proteína marcador de proliferação Ki67, um fator nuclear estreitamente associado à progressão do ciclo celular e amplamente expresso em células em divisão ativa, estando ausente em quiescência. A Ki67 associa-se à cromatina e à periferia dos cromossomos mitóticos, auxiliando na organização cromossômica e contribuindo para a progressão mitótica adequada e para a estrutura do nucléolo durante a intérfase. A sua expressão integra-se a programas centrais de controle do ciclo celular, incluindo vias que regulam a replicação do DNA, a mitose e os checkpoints, sendo por isso amplamente utilizada para quantificar estados proliferativos em tecidos e em células cultivadas. Níveis desregulados de Ki67 são frequentemente correlacionados com fenótipos hiperproliferativos e são explorados em estudos de biologia tumoral, regeneração tecidual e expansão de células imunes em modelos murinos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Ki67 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Mki67 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Mki67, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Mki67 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Ki67.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Mki67 para a investigação da sinalização de Ki67, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Mki67 críticos para a função Ki67
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Mki67 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Ki67 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Ki67 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Mki67. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Ki67 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Ki67 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Mki67 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Mki67 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.