Keratin 6B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421355

概要

Krt6bは、重層上皮の細胞骨格ネットワークを構築するためにI型ケラチンと対をなす、II型中間径フィラメントタンパク質であるケラチン6Bをコードします。ケラチン6Bは、機械的強靭性、上皮のリモデリング、創傷修復や過増殖状態に伴うストレス誘導性プログラムを支え、分化や細胞骨格の組織化プロセスと連携して機能します。マウスの皮膚および関連する付属器では、Krt6b発現は損傷や炎症時に誘導され、ケラチンフィラメントのダイナミクスをバリア機能および組織恒常性と結び付けています。ケラチンネットワークの制御不全は上皮の脆弱性や異常角化の表現型と関連するため、Krt6bはケラチン依存的なストレス応答を研究するうえで有用な標的（ノード）となります。

Keratin 6B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるKrt6b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Krt6b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Krt6bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Keratin 6Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Keratin 6Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Krt6b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Keratin 6Bの機能に不可欠なKrt6bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Krt6bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Keratin 6B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびKeratin 6B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Krt6b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Keratin 6B HDRプラスミド（m）および Keratin 6B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKrt6bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKrt6b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。