KCNQ3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403544

Descripción general

KCNQ3 codifica la subunidad Kv7.3 de los canales de potasio dependientes de voltaje que conducen la corriente M neuronal, un regulador clave de la excitabilidad de la membrana y de la adaptación de la frecuencia de disparo. Al modular las conductancias subumbrales, KCNQ3 participa en vías que controlan el umbral del potencial de acción, la integración sináptica y las oscilaciones de red, a menudo en conjunto con complejos de canales que contienen KCNQ2. La alteración de las corrientes mediadas por KCNQ3 modifica la dinámica de disparo neuronal y se ha asociado con fenotipos neurodel desarrollo y epilépticos, lo que lo hace relevante para estudios sobre la función de los circuitos corticales. KCNQ3 también se utiliza como diana de lectura funcional en flujos de trabajo de farmacología de canales iónicos y electrofisiología que investigan la señalización relacionada con la excitabilidad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KCNQ3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNQ3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNQ3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNQ3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KCNQ3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNQ3 para la investigación de la señalización de KCNQ3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KCNQ3 críticos para la función de KCNQ3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNQ3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KCNQ3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KCNQ3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNQ3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KCNQ3 (h) y el plásmido HDR KCNQ3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNQ3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNQ3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.