KCC4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405528-ACT

SLC12A7はヒトKCC4（K–Cl共輸送体4）をコードしており、K+とCl−の流出を共役させて細胞内塩化物濃度、細胞容積の恒常性、および膜興奮性を調節する電気的中性のトランスポーターである。KCC4の活性は上皮におけるイオン輸送やpH関連プロセスに寄与し、多様な組織における浸透圧バランスおよび塩化物依存性シグナル伝達を形成する。Cl−勾配の調節を介して、KCC4は神経細胞の抑制性伝達や、遊走・浸潤表現型に関連する細胞骨格ダイナミクスにも影響し得る。SLC12A7/KCC4の発現変化は複数の疾患文脈で報告されており、イオン輸送の破綻、細胞ストレス応答、組織リモデリングの機序解明における研究対象として支持されている。

KCC4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC12A7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KCC4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC12A7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC12A7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KCC4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC12A7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKCC4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC12A7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKCC4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。