KBTBD6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409349

Panoramica

KBTBD6 (kelch repeat and BTB domain containing 6) codifica una proteina della famiglia BTB–BACK–Kelch, prevista agire come adattatore di substrato all’interno di complessi ligasi E3 dell’ubiquitina basati su CUL3. Attraverso il legame alla cullina mediato dal dominio BTB e il riconoscimento del substrato dipendente dal dominio Kelch, KBTBD6 è in grado di regolare l’ubiquitinazione e il turnover proteasomiale di proteine che controllano la progressione del ciclo cellulare, l’organizzazione del citoscheletro e la segnalazione di risposta allo stress. Questi processi di controllo della qualità proteica influenzano vie quali la degradazione dipendente dall’ubiquitina e i relativi programmi trascrizionali e proliferativi. La disregolazione degli adattatori delle ligasi dell’ubiquitina è spesso associata ad alterazioni della proteostasi e degli stati di segnalazione osservati nel cancro e in altri disturbi, rendendo KBTBD6 rilevante per studi meccanicistici della regolazione mediata dall’ubiquitina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KBTBD6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KBTBD6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KBTBD6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KBTBD6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KBTBD6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KBTBD6 per lo studio della segnalazione di KBTBD6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KBTBD6 critici per la funzione di KBTBD6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KBTBD6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KBTBD6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KBTBD6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KBTBD6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KBTBD6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KBTBD6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KBTBD6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KBTBD6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.