karyopherin β3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402071-NIC

IPO5はカリオフェリンβ3（インポーチン5）をコードしており、特定の核局在化シグナルを認識して、核膜孔複合体を介したタンパク質カーゴのRan GTPase依存的な核内輸送を仲介する核輸送受容体です。核・細胞質間輸送を制御することで、IPO5は転写因子やRNA結合タンパク質の空間的制御を通じて、転写プログラム、細胞周期の進行、分化に関連するシグナル伝達経路の調節に寄与します。インポーチン活性の変化や核輸送の破綻は、がんを含む増殖性疾患で繰り返し見られる特徴であり、IPO5は制御タンパク質の誤局在化を介した異常な増殖シグナルとも関連付けられています。そのためIPO5は、核輸送経路の再構築、ストレス応答、形質転換細胞におけるゲノムワイドな依存性の文脈で、しばしば研究対象となっています。

karyopherin β3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IPO5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IPO5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IPO5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IPO5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。