Junctophilin-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401805

Panoramica

JPH2 codifica la junctofilina-2, una proteina di ancoraggio di membrana che stabilizza i complessi di giunzione tra la membrana plasmatica/i tubuli T e il reticolo sarcoplasmatico nel muscolo striato. Mantenendo l’accoppiamento su scala nanometrica tra i canali del Ca²⁺ di tipo L e i recettori della rianodina, la JUNCTOPHILIN-2 supporta l’accoppiamento eccitazione–contrazione e un efficiente rilascio intracellulare di Ca²⁺. La funzione di JPH2 si interseca con le vie di gestione del Ca²⁺ che influenzano la contrattilità, la segnalazione elettrica e i programmi trascrizionali a valle dipendenti dal calcio. Alterazioni dell’espressione o dell’organizzazione di JPH2 sono state associate al rimodellamento dei tubuli T nei cardiomiociti e a un’omeostasi del Ca²⁺ disregolata, caratteristiche collegate a cardiomiopatie ereditarie e acquisite e a fenotipi aritmogeni in modelli sperimentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Junctophilin-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene JPH2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del JPH2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto JPH2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Junctophilin-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di JPH2 per lo studio della segnalazione di Junctophilin-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni JPH2 critici per la funzione di Junctophilin-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di JPH2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Junctophilin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Junctophilin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus JPH2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Junctophilin-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Junctophilin-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia JPH2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio JPH2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.