JMJD2A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432966

Visão geral

Kdm4a codifica, no camundongo, a desmetilase de lisina em histonas JMJD2A (KDM4A), uma enzima com domínio JmjC que remove marcas de metilação repressoras e ativadoras em H3K9 e H3K36, modulando a acessibilidade da cromatina e programas transcricionais. Ao acoplar o estado epigenético a processos dependentes de DNA, a JMJD2A influencia a progressão do ciclo celular, as respostas ao estresse de replicação e a estabilidade genômica, além de interagir com vias que regulam a diferenciação e a transcrição responsiva a hormônios. A atividade desregulada da família KDM4 tem sido associada a sinalização oncogênica alterada, reparo de DNA defeituoso e expressão aberrante de genes do desenvolvimento, tornando Kdm4a um alvo frequente em estudos de mecanismos de doença mediados pela cromatina. Em sistemas murinos, a perturbação de Kdm4a é comumente usada para investigar como a dinâmica de metilação de histonas coordena redes transcricionais e a plasticidade celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO JMJD2A (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Kdm4a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Kdm4a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Kdm4a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína JMJD2A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Kdm4a para a investigação da sinalização de JMJD2A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Kdm4a críticos para a função JMJD2A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Kdm4a para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo JMJD2A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo JMJD2A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Kdm4a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo JMJD2A Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR JMJD2A (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Kdm4a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Kdm4a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.