Islet-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421157-ACT

O Isl1 de camundongo codifica o Islet-1, um fator de transcrição do tipo LIM-homeodomínio que coordena a especificação do destino celular e programas de diferenciação durante a embriogênese. O Islet-1 regula redes gênicas envolvidas no desenvolvimento endócrino pancreático, na formação de neurônios motores e na biologia de progenitores cardíacos, integrando-se a vias de sinalização do desenvolvimento para controlar o comprometimento de linhagem e a maturação. A atividade desregulada de ISL1 tem sido associada a alterações na identidade e função de células β, a defeitos do neurodesenvolvimento que afetam circuitos motores e a fenótipos cardíacos congênitos em sistemas modelo, tornando-o um nó útil para estudar o controle transcricional da organogênese. Como marcador de linhagem e de progenitores, o Islet-1 é frequentemente utilizado para mapear trajetórias de desenvolvimento e para investigar elementos regulatórios que moldam a expressão gênica específica de tecidos.

Islet-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Isl1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Islet-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Isl1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Isl1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Islet-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Isl1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Islet-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Islet-1 em células tumorais com expressão de Isl1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.