ISGF-3γ p48 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421156-ACT

O fator regulador de interferon 9 (Irf9), também conhecido como ISGF-3γ p48, codifica um componente de ligação ao DNA do complexo fator 3 de genes estimulados por interferon (ISGF3), que coopera com STAT1 e STAT2 para transduzir sinais de interferons do tipo I e do tipo III. Após o engajamento do receptor de interferon e a ativação de JAK/STAT, o IRF9 ajuda a direcionar o ISGF3 para elementos de resposta a genes estimulados por interferon (ISREs), coordenando programas transcricionais envolvidos na defesa antiviral, na apresentação de antígenos e na regulação da imunidade inata. Em modelos murinos, a atividade de Irf9 influencia redes de sinalização de citocinas e o crosstalk entre vias de interferon e programas inflamatórios mais amplos. A transcrição dependente de IRF9 desregulada tem sido investigada em contextos de responsividade imune alterada, inflamação crônica e interações hospedeiro–patógeno relevantes para mecanismos de doenças mediadas pelo sistema imune.

ISGF-3γ p48 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Irf9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ISGF-3γ p48 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Irf9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Irf9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ISGF-3γ p48. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Irf9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ISGF-3γ p48 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ISGF-3γ p48 em células tumorais com expressão de Irf9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.