Plásmido CRISPR de Activación (m) ISGF-3γ p48: sc-421156-ACT

El factor regulador de interferón 9 (Irf9), también conocido como ISGF-3γ p48, codifica un componente de unión al ADN del complejo del factor 3 de genes estimulados por interferón (ISGF3), que coopera con STAT1 y STAT2 para transducir señales de interferón de tipo I y tipo III. Tras la unión del receptor de interferón y la activación de JAK/STAT, IRF9 ayuda a dirigir ISGF3 hacia los elementos de respuesta a interferón (ISRE), coordinando programas transcripcionales implicados en la defensa antiviral, la presentación de antígenos y la regulación de la inmunidad innata. En modelos murinos, la actividad de Irf9 influye en redes de señalización de citocinas y en el diálogo cruzado entre las vías de interferón y programas inflamatorios más amplios. La transcripción dependiente de IRF9 desregulada se ha investigado en contextos de respuesta inmunitaria alterada, inflamación crónica e interacciones huésped–patógeno relevantes para mecanismos de enfermedad mediada por el sistema inmunitario.

ISGF-3γ p48 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Irf9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ISGF-3γ p48 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Irf9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Irf9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ISGF-3γ p48. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Irf9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ISGF-3γ p48 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ISGF-3γ p48 en células tumorales con expresión de Irf9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.