ISGF-3γ p48 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400958-ACT

IRF9 codifica o ISGF-3γ p48, um componente essencial de ligação ao DNA do complexo do fator 3 de genes estimulados por interferon (ISGF3), que atua em conjunto com STAT1 e STAT2 para converter a sinalização de interferon do tipo I em programas transcricionais. Após estímulo por IFN-α/β, o ISGF3 liga-se a elementos de resposta estimulados por interferon (ISREs) para induzir fatores de restrição antivirais, a maquinaria de apresentação de antígenos e moduladores da imunidade inata centrais para a saída da via JAK–STAT. A atividade de IRF9 molda as respostas celulares à infecção viral e a sinais inflamatórios, e a desregulação de redes de genes estimulados por interferon está implicada em desequilíbrio imune e patologia mediada por interferon. Como regulador transcricional nodal, o IRF9 é frequentemente estudado em interações hospedeiro–patógeno, crosstalk da sinalização de citocinas e no controle transcricional da imunidade inata.

ISGF-3γ p48 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IRF9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ISGF-3γ p48 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IRF9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IRF9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ISGF-3γ p48. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IRF9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ISGF-3γ p48 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ISGF-3γ p48 em células tumorais com expressão de IRF9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.