IRS-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400096-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- IRS-1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase IRS-1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase IRS-1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para IRS1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:IRS-1 Anticorpo (H-7): sc-515017
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
IRS-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400096-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IRS-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400096-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O substrato do recetor de insulina 1 (Insulin receptor substrate 1, IRS1) codifica a IRS-1, uma proteína adaptadora central que liga os recetores de insulina e de IGF-1 ativados à sinalização a jusante através das vias PI3K–AKT–mTOR e RAS–MAPK. A fosforilação em tirosina da IRS-1 coordena o recrutamento de efetores com domínio SH2, integrando sinais que regulam a captação de glicose, a síntese de glicogénio, a tradução proteica, o crescimento celular e a sobrevivência. A função da IRS-1 é modulada por fosforilações inibitórias em serina/treonina e por retroalimentação de mTOR/S6K, moldando a sensibilidade à insulina e a dinâmica da sinalização por nutrientes. A desregulação da sinalização IRS1/IRS-1 é amplamente estudada na resistência à insulina e na síndrome metabólica, e alterações na organização destas vias também são relevantes para fenótipos proliferativos e de resposta ao stress no cancro e noutras doenças complexas.
IRS-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus IRS1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de IRS1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função IRS1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com IRS1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.