IRG1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-418001-LAC-2

O ACOD1 humano codifica a IRG1 (gene 1 responsivo ao sistema imunitário), uma enzima associada às mitocôndrias que catalisa a conversão de cis-aconitato em itaconato, ligando o ciclo do ácido tricarboxílico à regulação imunometabólica. A produção de itaconato induzida pela IRG1 modula a ativação de macrófagos, as respostas ao stress oxidativo e eletrofílico e a sinalização inflamatória, por meio de efeitos sobre a respiração mitocondrial e as espécies reativas de oxigénio, com impactos a jusante em vias como a Nrf2 e o metabolismo dependente da succinato desidrogenase. A atividade desregulada de ACOD1/IRG1 tem sido implicada na remodelação metabólica associada a infeções e inflamação e na biologia do microambiente tumoral, refletindo o seu papel na interface entre a imunidade inata e o metabolismo celular. A edição genética de ACOD1 apoia estudos mecanísticos do fluxo metabólico, de programas de citocinas e da função mitocondrial em modelos imunitários e oncológicos relevantes, utilizando leituras transcriptómicas, metabolómicas e funcionais.

As Partículas de Ativação Lentivirais IRG1 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ACOD1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais IRG1 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ACOD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de IRG1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ACOD1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.