Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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IRF3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-417171-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- IRF3 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- IRF3ダブルニカースプラスミド（h）およびIRF3ダブルニカースプラスミド（h2）は、IRF3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: IRF3 抗体 (SL-12): sc-33641
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
IRF3 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-417171-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IRF3 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-417171-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
インターフェロン制御因子3（IRF3）は、ウイルスおよび細胞質核酸の検知に対する初期の自然免疫応答を統括する、広く発現している転写因子である。cGAS–STING、RIG-I/MDA5–MAVS、TLR3–TRIF などのパターン認識受容体経路の下流で活性化されると、IRF3 は TBK1/IKKε によりリン酸化され、二量体化したのち核へ移行し、I型インターフェロンおよびインターフェロン刺激遺伝子の発現を誘導する。このプログラムを通じて、IRF3 は抗ウイルス制限、NF-κB との炎症性シグナルのクロストーク、さらにはアポトーシスなどの細胞ストレス応答を形成する。IRF3 活性の破綻は、感染免疫学で観察される異常なインターフェロンシグナル、自炎症性の表現型、腫瘍と免疫の相互作用にまたがって関与が示唆されており、自然免疫の機序研究における中心的なハブとなっている。
IRF3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IRF3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IRF3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IRF3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IRF3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。