IRF-1 CRISPR Activationプラスミド (r): sc-437365-ACT

インターフェロン制御因子1（IRF-1）は、ラット細胞においてインターフェロンシグナル伝達を自然免疫および獲得免疫プログラムと統合する、配列特異的な転写因子である。JAK/STAT経路の下流で活性化されると、IRF-1は抗ウイルス制限、抗原のプロセシングおよび提示、ならびにサイトカイン／ケモカインネットワークに関与するインターフェロン刺激遺伝子の転写を促進し、同時に細胞周期チェックポイントやアポトーシスにも影響を与える。さらにNF-κBや他のストレス応答性制御因子とのクロストークを介して、IRF-1は炎症関連遺伝子の発現や免疫細胞の分化の方向性を形作る。IRF-1活性の破綻は、実験モデルにおいて異常な免疫活性化や宿主防御の低下と関連づけられており、感染、炎症、免疫介在性の組織障害を研究する上での重要性が示されている。

IRF-1 CRISPR活性化プラスミド（r）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IRF-1 CRISPR 活性化プラスミド (r) は、ヒト細胞株における 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体は転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IRF-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然の遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIRF-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、および発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIRF-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。