IRAK-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404304-NIC

ヒトのIRAK2は、インターロイキン1受容体関連キナーゼ2（IRAK-2）をコードしており、セリン／スレオニンキナーゼファミリーに属する分子で、Toll様受容体（TLR）およびIL-1受容体の下流における中核的なシグナル伝達中間体として機能します。IRAK-2はMyD88依存性のシグナル伝達複合体に参加し、NF-κBおよびMAPK経路の活性化に寄与するとともに、炎症性サイトカインや自然免疫応答を制御する転写プログラムの形成に関与します。TIRドメイン受容体シグナル伝達における役割を通じて、IRAK-2は免疫細胞の活性化、病原体応答シグナル、ならびにストレス応答やアポトーシス関連経路とのクロストークにも影響を与えます。IRAK2関連シグナル伝達の破綻（ディスレギュレーション）は、異常な炎症状態や、複数の疾患状況にわたって観察される免疫シグナルの変調と関連づけられており、経路に焦点を当てた研究における機序解明ターゲットとしての有用性を支持しています。

IRAK-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IRAK2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IRAK2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IRAK2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IRAK2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。