IPP-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402634-ACT

PPP1R1A は、プロテインホスファターゼ1（PP1）の阻害因子である IPP-1（inhibitor of protein phosphatase 1）をコードしている。IPP-1 はリン酸化によって制御されるモジュレーターで、PP1 の触媒活性に結合して抑制し、セリン／スレオニン脱リン酸化の強度（振幅）とタイミングを調節する。cAMP/PKA をはじめとする各種キナーゼ経路からのシグナルを統合することで、IPP-1 はイオンチャネル制御、細胞骨格ダイナミクス、転写制御など、リン酸化依存的な過程に影響を及ぼす。PPP1R1A の活性は、PP1 依存性基質の制御を介して神経シグナル伝達やシナプス可塑性とも関連しており、ホスファターゼ阻害の変化は神経精神疾患や神経変性疾患の文脈でのシグナル異常と関連づけられている。ホスファターゼとキナーゼのバランスを担う結節点として、PPP1R1A はリン酸化ネットワークや下流経路の再配線を研究するための扱いやすい手がかりを提供する。

IPP-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPP1R1Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IPP-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPP1R1A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPP1R1A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IPP-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPP1R1A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIPP-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPP1R1A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIPP-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。