Plásmido Doble Nickase (h) Integrin β6/ITGB6: sc-400999-NIC

ITGB6 codifica la subunidad β6 de la integrina, que se asocia con la integrina αv para formar el heterodímero αvβ6, restringido al epitelio y mediador clave de la adhesión célula–MEC y de la mecanotransducción. αvβ6 se une a ligandos que contienen el motivo RGD, como la fibronectina y la vitronectina, y puede activar TGF-β latente mediante su interacción con el complejo LAP, vinculando así a ITGB6 con la señalización de TGF-β/SMAD, la remodelación epitelial y el diálogo cruzado inmunitario–estromal. A través del ensamblaje de adhesiones focales y de vías aguas abajo que incluyen señalización FAK/SRC, MAPK y PI3K, ITGB6 influye en programas de migración, invasión y reparación de heridas. La expresión desregulada de ITGB6 se ha asociado con fibrosis, inflamación crónica y múltiples cánceres epiteliales, donde a menudo se estudia como impulsor de fenotipos invasivos y de la señalización del microambiente.

Integrin β6/ITGB6 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGB6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGB6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGB6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGB6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.