INSR/Insulin Receptor Plasmide Double Nickase (h): sc-400075-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- INSR/Insulin Receptor Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il INSR/Insulin Receptor Double Nickase Plasmid (h) e il INSR/Insulin Receptor Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira INSR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: INSR/Insulin Receptor β Antibody (CT-3): sc-57342
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
INSR/Insulin Receptor Plasmide Double Nickase (h) | sc-400075-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
INSR/Insulin Receptor Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400075-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INSR codifica il recettore umano dell’insulina, una tirosin-chinasi recettoriale che avvia la segnalazione dipendente dall’insulina per regolare l’assorbimento di glucosio, il metabolismo del glicogeno e dei lipidi e la crescita cellulare. Dopo il legame con il ligando e l’autofosforilazione, INSR recluta proteine adattatrici come IRS1/2 per attivare le vie PI3K–AKT–mTOR e RAS–RAF–MEK–ERK, coordinando programmi metabolici e mitogenici. La funzione di INSR influenza il traffico vescicolare di GLUT4 e, più in generale, il controllo del nutrient sensing e della segnalazione anabolica. Una segnalazione di INSR deregolata è implicata nella resistenza all’insulina e nelle malattie metaboliche ed è anche sfruttata da molti tipi di tumore per sostenere fenotipi di proliferazione e sopravvivenza.
INSR/Insulin Receptor Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus INSR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di INSR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di INSR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con INSR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.