Plásmido CRISPR de Activación (h) Inhibin α: sc-402958-ACT

INHA codifica la subunidad α de la inhibina, una glicoproteína secretada que forma heterodímeros con subunidades β para generar inhibina A e inhibina B, reguladores endocrinos clave de la síntesis hipofisaria de FSH y de la homeostasis del eje reproductivo. La señalización de inhibina/activina se integra con las vías de la superfamilia TGF-β para modular programas transcripcionales dependientes de SMAD que controlan el desarrollo gonadal, la esteroidogénesis y la foliculogénesis. La alteración de la expresión de INHA se ha asociado con una retroalimentación gonadotrópica desregulada, cambios en la función de las células de la granulosa y de Sertoli, y fenotipos endocrinos reproductivos. Debido a que la inhibina α influye en la proliferación y la diferenciación celular en tejidos reproductivos, se estudia con frecuencia en el contexto de la biología ovárica y testicular, redes de señalización sensibles a hormonas y modelos de biología tumoral.

Inhibin α El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de INHA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Inhibin α El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus INHA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional INHA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Inhibin α. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo INHA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Inhibin α en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Inhibin α en células tumorales con expresión de INHA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.