Inhibin α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402958-ACT

INHA codifica a inibina α, uma subunidade glicoproteica secretada que forma heterodímeros com subunidades β para gerar inibina A e inibina B, importantes reguladores endócrinos da síntese hipofisária de FSH e da homeostase do eixo reprodutivo. A sinalização de inibina/activina interage com vias da superfamília TGF-β para modular programas transcricionais dependentes de SMAD que controlam o desenvolvimento gonadal, a esteroidogênese e a foliculogênese. Alterações na expressão de INHA têm sido associadas à desregulação do feedback de gonadotrofinas, a mudanças na função de células da granulosa e de Sertoli e a fenótipos endócrinos reprodutivos. Como a inibina α influencia a proliferação e a diferenciação celular em tecidos reprodutivos, ela é frequentemente estudada no contexto da biologia ovariana e testicular, de redes de sinalização responsivas a hormônios e de modelos de biologia tumoral.

Inhibin α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de INHA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Inhibin α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus INHA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição INHA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Inhibin α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus INHA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Inhibin α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Inhibin α em células tumorais com expressão de INHA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.