ILT-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407764

概要

LILRB4は、免疫グロブリン様トランスクリプト3（immunoglobulin-like transcript 3：ILT-3）をコードしており、ILT-3は主に樹状細胞や単球／マクロファージといった骨髄系の抗原提示細胞に発現する抑制性白血球受容体です。ILT-3は、ITIM（immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif）依存的にホスファターゼをリクルートして抑制シグナルを伝達し、抗原提示、共刺激、炎症性サイトカイン産生に関連する活性化経路を抑えることで、免疫恒常性の維持に寄与します。これらの機序を通じて、ILT-3は骨髄系—リンパ系のクロストークにおけるT細胞の分極や寛容（トレランス）に関連するプログラムの形成を助けます。LILRB4／ILT-3の発現異常（破綻）は、慢性炎症、腫瘍微小環境における免疫回避、ならびに骨髄系腫瘍といった文脈で研究されており、抑制性シグナルの変化が免疫監視や組織免疫を調節し得ることが示唆されています。

ILT-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLILRB4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LILRB4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LILRB4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ILT-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ILT-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LILRB4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ILT-3の機能に不可欠なLILRB4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、LILRB4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ILT-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびILT-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LILRB4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ILT-3 HDRプラスミド（h）および ILT-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLILRB4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLILRB4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。