ILT-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407764

Descripción general

LILRB4 codifica el transcrito 3 similar a inmunoglobulina (ILT-3), un receptor inhibidor de leucocitos expresado predominantemente en células mieloides presentadoras de antígeno, como las células dendríticas y los monocitos/macrófagos. ILT-3 contribuye a la homeostasis inmunitaria al transmitir señales inhibitorias mediante el reclutamiento de fosfatasas dependiente de ITIM, atenuando vías de activación vinculadas a la presentación de antígenos, la coestimulación y la producción de citocinas inflamatorias. A través de estos mecanismos, ILT-3 ayuda a moldear la polarización de las células T y programas asociados a la tolerancia dentro del diálogo mieloide–linfoide. La expresión desregulada de LILRB4/ILT-3 se ha estudiado en contextos de inflamación crónica, evasión inmunitaria en el microambiente tumoral y neoplasias de la línea mieloide, donde una señalización inhibitoria alterada puede modular la vigilancia inmunitaria y la inmunidad tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ILT-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LILRB4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LILRB4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LILRB4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ILT-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LILRB4 para la investigación de la señalización de ILT-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LILRB4 críticos para la función de ILT-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LILRB4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ILT-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ILT-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LILRB4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ILT-3 (h) y el plásmido HDR ILT-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LILRB4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LILRB4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.