IL-4Rα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418209-ACT

O IL4R humano codifica a cadeia alfa do receptor de interleucina-4 (IL-4Rα), uma subunidade receptora partilhada por IL-4 e IL-13 que molda respostas imunitárias do tipo 2. A ligação do ligando promove a formação do complexo do receptor com IL2RG ou IL13RA1 e ativa quinases JAK com sinalização a jusante via STAT6, coordenando programas transcricionais envolvidos na diferenciação de linfócitos, na mudança de classe para IgE, na produção de muco e na polarização alternativa de macrófagos. A sinalização dependente de IL-4Rα cruza-se com as vias PI3K/AKT e MAPK para modular a sobrevivência celular e o tónus inflamatório nos compartimentos imunitário e epitelial. A atividade desregulada de IL4R está implicada na inflamação alérgica e na biologia da asma, e tem sido associada a fenótipos atópicos e à remodelação do microambiente imunitário no cancro e noutros contextos inflamatórios.

IL-4Rα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL4R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-4Rα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL4R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL4R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-4Rα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL4R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-4Rα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-4Rα em células tumorais com expressão de IL4R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.